Test ELISA detekuje četná onemocnění, a proto našel široké uplatnění v medicíně a dalších. Test ELISA je však nejlépe známý svou diagnózou boreliózy. Co je test ELISA? Jak interpretovat výsledky? Jaká je cena testu?
Obsah:
- Test ELISA - co detekuje? Uplatnění testu ELISA
- Test ELISA - jaký je test?
- Test ELISA a Lyme nemoc - kdy provést?
- Test ELISA - cena. Kolik stojí test ELISA?
- Test ELISA - výsledky. Mohou to být falešně pozitivní výsledky?
- Test ELISA - výsledky. Mohou být falešně negativní?
Test ELISA, tj. Enzymový imunosorbentní test, je běžně používanou laboratorní metodou, která slouží mimo jiné pro kvantitativní detekci protilátek v krvi.
Z tohoto důvodu se test ELISA používá při diagnostice bakteriálních onemocnění, jako je lymská borelióza.
Výhodou metody ELISA je její jednoduchost a možnost rychlé implementace i vysoká citlivost. Metoda ELISA se provádí pomocí speciálních plastových destiček s jamkami naplněnými např. Proteiny Borrelia (antigeny) a specifickými monoklonálními protilátkami, které jsou určeny k detekci protilátek ve vzorku pacienta.
Test ELISA - co detekuje? Uplatnění testu ELISA
Díky vysoké citlivosti a jednoduchosti metody ELISA byla metoda použitelná v diagnostice mnoha nemocí, ale je nejlépe známá jako diagnostická metoda lymské nemoci.
V případě diagnózy lymské boreliózy tzv nepřímá ELISA, která umožňuje detekovat specifické IgM nebo IgG v testovaném materiálu. Stejným způsobem lze detekovat protilátky pro diagnostiku:
- virové infekce: herpes viry (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, viry hepatitidy (HBV a HCV)
- infekce prvoků: toxoplazmóza, giardiáza
- autoimunitní onemocnění: celiakie (anti-tTG nebo anti-DPG protilátky), Hashimotova choroba (anti-TG a anti-TPO protilátky), zánětlivá onemocnění střev (anti-ASCA a anti-ANCA protilátky)
- parazitární onemocnění a alergie, při nichž jsou detekovány specifické protilátky IgE. Jejich zvýšená hladina může naznačovat přítomnost alergií, např. Na pyl a potraviny, nebo parazitární invazi (ozbrojená tasemnice, lidská škrkavka)
Existují také modifikace metody ELISA (tzv. Sendvičová ELISA), které umožňují detekci vzorku jiných proteinů než protilátek. Poté je cílem testu zjistit v biologickém materiálu:
- fragmenty virů nebo bakterií, nejčastěji jde o antigeny charakteristické pro daný patogen
- sérové hormony, např. estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
- enzymy, např. kalprotektin, pankreatická elastáza, alkalická fosfatáza
- nádorové markery, např. CA-125
- přítomnost léků v séru
Tato metoda je také použitelná v potravinářském průmyslu, kde dokáže detekovat stopy alergenů (např. Mléko, arašídy), GMO nebo toxinů v potravinách.
ELISA test - o co jde?
Diagnóza například lymské boreliózy metodou ELISA spočívá v detekci imunitních proteinů v biologickém materiálu - protilátkách, které vznikají při reakci na antigeny borelie.
Protilátky se testují ve dvou třídách, IgM a IgG. IgM jsou první protilátky, které se objevují v těle při kontaktu s bakteriemi a postupem času se snižují.
Jejich místo zaujímají trvalejší IgG protilátky, které mohou zůstat v těle několik desítek let.
Tímto způsobem je přítomnost bakterií v těle nepřímo testována detekcí protilátek specificky namířených proti spirochetám Borrelia.
Protilátky v různých stádiích infekce mohou být namířeny proti různým proteinům borelie. Například v rané fázi je to protein p41.
V pozdějších fázích se začíná objevovat stále více proteinů, jako jsou p21, p30, p39, p43. To je důvod, proč je diagnostika lymské boreliózy extrémně obtížná.
Výběr bakteriálních proteinů je nesmírně důležitý, aby měl test vysokou diagnostickou hodnotu. Proto by se při diagnostice lymské boreliózy měly běžně používat testy ELISA II. Nebo III. Generace, při nichž se k dosažení nejspolehlivějšího výsledku vyberou sady proteinů.
Test ELISA a borelióza. Kdy dělat?
Lymská borelióza je bakteriální onemocnění způsobené bakterií Borrelia burgdorferi a mnoha jejími odrůdami.
Diagnóza onemocnění není snadná kvůli složitosti imunitní odpovědi proti borreliím a nedokonalostem laboratorních metod.
Nejběžněji používanou laboratorní metodou je vysoce citlivá metoda ELISA, která detekuje specifické protilátky vytvořené proti bakteriálním proteinům.
V diagnostice lymské boreliózy se používá nepřímá metoda ELISA, v níž se rozlišují následující stadia:
- inkubace jamek na destičce s materiálem odebraným od pacienta, např. sérem. Pokud jsou v testovaném materiálu protilátky proti borreliím, vážou se dobře na proteiny ve spodní části reakce
- poté se přebytečné sérum vypláchne speciální promývací tekutinou (pufrem) a tzv konjugát, tj. protilátka navázaná na enzym, který se váže na dříve navázané protilátky v reakčních jamkách
- poté se přidá substrát pro konjugát a proběhne barevná reakce (pozitivní výsledek) nebo žádná barevná reakce (negativní výsledek)
- posledním krokem je odečet koncentrace protilátek proti borreliím v séru pacienta čtenářem (spektrofotometr)
Test ELISA na lymskou boreliózu se provádí z krve a v případě neurologických příznaků (neuroborelióza) také z mozkomíšního moku.
Synoviální tekutina by neměla být testována, protože existuje vysoká pravděpodobnost falešně pozitivních výsledků.
Základem pro diagnostiku onemocnění jsou klinické příznaky, které jej naznačují, potvrzené výsledky laboratorních testů.
Přidání výsledku laboratorního testu bez příznaků neautorizuje diagnózu lymské boreliózy, protože bylo prokázáno, že protilátky proti borreliím jsou detekovány také u zdravých lidí.
Sérologická diagnóza lymské boreliózy začíná semikvantitativním screeningovým testem ELISA. Pokud je výsledek negativní, znamená to, že nebyly detekovány žádné spirochety Borrelia nebo je výsledek falešně negativní.
Pokud je výsledek pozitivní nebo slabě pozitivní (nejednoznačný), mělo by být provedeno potvrzující testování Western blot, které se vyznačuje vysokou specificitou.
Tím se potvrzuje, že výsledky testu ELISA jsou „pravdivé“. Během diagnostiky nemůžete přeskočit žádný z výše uvedených kroků a například okamžitě provést diagnostiku pomocí metody Western blot nebo provést diagnózu pouze na základě pozitivního výsledku ELISA.
V Polsku diagnóza lymské boreliózy velmi často končí v první fázi screeningu, což vede k nesprávné interpretaci pozitivních nebo slabě pozitivních výsledků.
Doporučený článek:
Test transformace lymfocytů (LTT) Je dobré vědětTest ELISA - cena. Kolik stojí test ELISA?
Test stojí přibližně 60 PLN a je prováděn okamžitě. Na výsledky doporučení však můžete počkat asi tři měsíce.
Test ELISA - výsledky. Mohou to být falešně pozitivní výsledky?
Falešně pozitivní výsledky jsou výsledkem zkřížené reaktivity protilátek IgM s jinými proteiny. Protilátky produkované tělem mohou „nesprávně“ rozpoznávat antigen z jiných mikroorganismů jako antigen Borrelia.
Nejčastější „chyby“ se vyskytují u lidí infikovaných treponema pallidum, herpesviry a u lidí se systémovým lupus erythematodes a jinými revmatickými chorobami.
Test ELISA - výsledky. Mohou být falešně negativní?
Falešně negativní výsledky se mohou objevit v časném stadiu infekce, poté by měl být test opakován přibližně po 3-4 týdnech. Tomu se říká sérologické okno, to je počáteční období infekce, ve kterém tělo ještě „nestihlo“ produkovat specifické protilátky.
Stejně tak u lidí s imunodeficiencí, kteří neprodukují dostatek protilátek.
Velkým problémem, zejména u velmi intenzivních infekcí, je výskyt tzv imunitní komplexy, které se skládají z antigenů Borrelia spirochetes a protilátek specifických pro ně.
Ve výsledku se protilátky stanou „neviditelnými“ pro běžně používané metody, jako je ELISA, a přestože jsou přítomny v testovaném materiálu, nelze je detekovat.
V takových případech může laboratoř použít rozložení imunitních komplexů. Tato léčba je navržena tak, aby uvolňovala protilátky. Tato metoda však není široce používána kvůli nedostatečné standardizaci v laboratořích.
Stojí za to vědětProč není diagnóza lymské boreliózy snadná?
Důvodem je složitost imunitní odpovědi proti borreliím a omezení laboratorních metod. Rozmanitost odrůd a výskyt nových, které způsobují infekce, zejména na evropském kontinentu, neumožňují vývoj účinných diagnostických metod.
V Evropě se nedávno objevilo více odrůd, jako je Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana a Borrelia spielmanii. Kromě toho se spirochety Borrelia v těle mohou změnit na cysty nebo zůstat na místech těla nepřístupných buňkám imunitního systému.
Být tak „neviditelný“ pro imunitní systém. Kromě toho se ukázalo, že tkáně mohou obsahovat fragmenty bakterií, které mají silně prozánětlivé vlastnosti. Věří se, že jsou zodpovědní za chronické příznaky lymské boreliózy navzdory negativním výsledkům laboratorních testů.
Literatura
1. Witecka-Knysz E. a kol. Lyme nemoc: proč je diagnóza tak obtížná? Laboratorní diagnostik duben 2007.
2. Moore A. a kol. Aktuální pokyny, běžné klinické úskalí a budoucí pokyny pro laboratorní diagnostiku lymské boreliózy, USA. Emerg Infect Dis. 2016 červenec; 22 (7).
3. Laboratorní diagnostika chorob přenášených klíšťaty. Doporučení pracovní skupiny: Národní komora laboratorních diagnostiků, Národní ústav veřejného zdraví - Národní hygienický ústav, Národní konzultant v oblasti infekčních nemocí, Ústav infekčních nemocí a neuroinfekcí, Lékařská univerzita v Białystoku, Polská virologická společnost, Varšava 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) from A to Z. Springer 2017.
